97久久精品人人槡人妻人,图片 小说 校园 激情 都市,青草久久欧美又黑又粗又大,隔壁邻居是巨爆乳寡妇

當(dāng)前位置:主頁 > 新聞中心 > 紫外可見分光光度計(jì)法測定核酸核苷酸的原理
紫外可見分光光度計(jì)法測定核酸核苷酸的原理
更新時(shí)間:2016-05-30 點(diǎn)擊次數(shù):3410

紫外可見分光光度計(jì)法測定核酸核苷酸的原理


核酸、核苷酸及其衍生物的分子結(jié)構(gòu)中的嘌呤、嘧啶堿基具有共軛雙健 系統(tǒng)(-C=C 一C=C 一),能夠強(qiáng)烈吸收250~280nm 波長的紫外光。核 酸(DNA,RNA)的zui大紫外吸收值在260nm 處。遵照Lambert-Beer 定律, 可以從紫外光吸收值的變化來測定核酸物質(zhì)的含量。在不同pH 溶液中嘌呤、 嘧啶堿基互變異構(gòu)的情況不同,紫外吸收光也隨之表現(xiàn)出明顯的差異,它們 的摩爾消光系數(shù)也隨之不同。所以,在測定核酸物質(zhì)時(shí)均應(yīng)在固定的pH 溶 液中進(jìn)行。
核酸的摩爾消光系數(shù)(或吸收系數(shù)),通常以ε(ρ)來表示,即每升含 有一摩爾核酸磷的溶液在260nm 波長處的消光值(即光密度,或稱為光吸 收)。核酸的摩爾消光系數(shù)不是一個(gè)常數(shù),而是依賴于材料的前處理、溶液 的pH 和離子強(qiáng)度發(fā)生變化。它們的經(jīng)典數(shù)值(pH = 7.0)如下:
DNA 的ε(ρ)= 6 000 - 8 000
RNA 的ε(ρ)= 7 000 -10 000
含1μg /mL RNA 溶液的光密度為0.022~0.024。采用紫外分光光度法測 定核酸含量時(shí),通常規(guī)定:在260nm 波長下,濃度為1μg/mL 的DNA 溶液 其光密度為0.020,而濃度為1μg/mL 的RNA 溶液其光密度為0.024。因此, 測定未知濃度的DNA(RNA)溶液的光密度OD260nm,即可計(jì)算測出其中 核酸的含量。
該法簡單、快速、靈敏度高,如核酸3μg/mL 的含量即可測出。對于 含有微量蛋白質(zhì)和核苷酸等吸收紫外光物質(zhì)的核酸樣品,測定誤差較小,若 樣品內(nèi)混雜有大量的上述吸收紫外光物質(zhì),測定誤差較大,應(yīng)設(shè)法事先除去。
三、器材
1、分析天平;2、離心機(jī); 3、容量瓶;4、紫外分光光度計(jì);5、吸管
6、冰浴或冰箱
四、試劑
1、5%~6%氨水
2、鉬酸銨-高氯酸試劑(沉淀劑)。如配制200mL 可在193mL 蒸餾水中加
入7mL70%高氯酸和0.5g 鉬酸銨。
五、操作
1、用分析天平準(zhǔn)確稱取待測的核酸樣品500 mg,加少量蒸餾水調(diào)成 糊狀,再加入少量的水稀釋。然后用5%~6%氨水調(diào)至pH7,定容到50mL。
2、取2 支離心管,向*支管內(nèi)加入2mL 樣品溶液和2mL 蒸餾水; 向第二支管內(nèi)加入2mL 樣品溶液和2mL 沉淀劑,以除去大分子核酸作為對照。 混勻。在冰浴或冰箱中放置30 分鐘后離心(3000r/min,10 分鐘)。從* 管和第二管中分別吸取0.5mL 上清液,用蒸餾水定容到50mL。用光程為1cm 的石英比色杯,于260nm 波長處測其光吸收值(A1 和A2)。
六、計(jì)算
如果已知待測的核酸樣品不含酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸, 即可將樣品配制成一定濃度的溶液(20~50kg/mL)在紫外分光光度計(jì)上直接 測定。

掃一掃,加微信

版權(quán)所有 © 2019 上海奧析科學(xué)儀器有限公司
備案號(hào):滬ICP備13035263號(hào)-2 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 GoogleSitemap

777亚洲精品乱码久久久久久| 粗大猛烈进出高潮视频大全| 白洁一晚挨十二炮| 国语自产精品视频在线完整版| 宝贝帮我拉开拉链它想你了| 一女三黑人玩4p惨叫| 亚洲精品无码久久久久苍井空| 国产色在线 | 日韩| 啦啦啦资源视频在线观看8| 妺妺窝人体色www聚色窝仙踪| 久久久AV波多野一区二区| 国产FREEXXXX性播放麻豆| 国产GV猛男GV无码男同网站| 娇小萝被两个黑人用半米长| 无码AV专区丝袜专区| 不说就继续这样弄你| 99久久国产精品免费| 杂交bucsm人类ssba| 14MAY18XXXXXL日本| 亚洲∧v久久久无码精品| 久久人人爽爽人人爽人人片av| 主人在调教室性调教女仆游戏| 少妇和大狼拘作爱a片| 免费观看全黄做爰| 97在线国内自拍视频| g片男a同志y免费网站| 唐三偷喝宁荣荣乳液污黄文| 国产真实乱人偷精品视频免费| 久久久久亚洲av成人网人人软件 | 人妻巨大乳挤奶水HD免费看| free×性护士vidos中国| 久久久久99精品成人片a片试看| 疯狂做受xxxx国产| 一人观看的电影免费观看| 把腿扒开让我添30分钟视频| 夫妻之间看的视频哔哩哔哩| 日韩亚洲变态另类中文| 国产精品久久久久久久久久直播 | 躺着把jiji向上摁平然后揉搓| 久久av无码乱码a片无码波多| 国产精品18久久久久久vr|